循环次数 ：一般为25 a～ 30次。循环数决议PCR扩增的产值。模板初始浓度低，可添加循环数以便到达有用的 扩增量。但循环数并不是能够无限添加的。一般循环数为30个左右，循环数超越30个今后，DNA聚合酶活性逐步到达饱满，产品的量不再随循环数的添加而添加，呈现了所谓的“渠道期。
1.预变性模板DNA*变性与PCR酶的*激活对PCR能否成功至关重要，主张加热时刻参阅试剂说明书，一般未润饰的Taq酶激活时刻为两分钟。2.变性过程循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列*变性，或许的情况下可缩短该过程时刻。变性时刻过长危害酶活性，过短靶序列变性不*，易形成扩增失利。3.引物退火退火温度需要从多方面去决议，一般依据引物的Tm值为参阅，依据扩增的长度恰当下调作为退火温度。然后在此次试验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。4.引物延伸引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度比较高时，本过程可省掉延伸时刻随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。5.循环数大多数PCR含25-35循环，过多易发生非特异扩增。6.zuì后延伸在zuì后一个循环后，反响在72℃保持10-30分钟．使引物延伸*，并使单链产品退火成双链。